127 ไม้เสม็ดขาว สำรวจและเก็บใบอ่อน ไม้เสม็ดขาวจากป่าธรรมชาติ 3 ประชากรๆละ 23 - 26 ต้น ในภาคใต้บริเวณ ป่าพรุ จังหวัดนราธิวาส ดังรายละเอียดใน ตารางที่ 13.1 วิธีการเก็บใบอ่อนจะเหมือนกับการเก็บในไม้สะเดา ไทย อนึ่งใบอ่อนที่เก็บได้จากไม้ทั้งสองชนิดจะแช่ไว้ในกล่องรักษาความเย็นเพื่อรักษาสภาพเซลล์และเอนไซม์ ของใบที่เก็บให้สดและไม่ถูกทำลายจากอุณหภูมิที่สูงเกินไปก่อนนำมาศึกษาในห้องปฏิบัติการ DNA และ Isoenzyme วิธีการศึกษาวิจัย การศึกษาระบบการสืบพันธุ์ (Mating system) นำเอาเมล็ดสนสองใบจาก 11 ประชากรๆ ละ 8 - 30 ต้น มาแช่น้ำค้างคืนแบบแยกต้นและคัดแยก เมล็ดที่ลอยน้ำซึ่งเป็นเมล็ดลีบ (Empty seed) ออก เอาแต่เมล็ดดี (Full seed) มาต้นละ 6 เมล็ด กรณีที่ ประชากรนั้นมี 8 ต้น จะใช้เมล็ดดี 15 เมล็ด นำเมล็ดแต่ละเมล็ดมาแยก Embryo และ Endosperm แยก สกัด Crude extraction ใน Buffer ( 0.08 M Tris-HCl pH 7.2) ในภาชนะที่เตรียมไว้ นำ Crude extraction ที่ได้ไป Apply บน Starch gel electrophoresis โดยศึกษาใน Enzymes 11 ระบบ (Systems) ตารางที่13.2 เพื่อหา Isoenzyme phenotype และ Genotype ของ Isoenzyme gene แต่ละตำแหน่ง (รายละเอียดในการศึกษา ศึกษาได้จาก สุจิตรา (2535), สุจิตรา (2536ก) และ Changtragoon and Finkeldey (1995b) นำเอาข้อมูลโครงสร้างทางพันธุกรรม (Genotypic structure) ของ Isoenzyme gene แต่ละตำแหน่งมาหาอัตราการผสมตัวเอง (Selfing rate) โดยใช้ Computer program ของ Ritland and Jain (1981) การศึกษาความหลากหลายทางพันธุกรรม (Genetic diversity) นำเอาใบอ่อนแต่ละต้นจากแต่ละประชากรของไม้สะเดาไทยและไม้เสม็ดขาวมาสกัด Crude Extraction ใ น Buffer (0.132M Tris, 0.003M Triplex II, 5เ ป อ ร์เ ซ็น ต์ PVP, 0.003 M DTT แ ล ะ 1 เปอร์เซ็นต์ Merceptoethanol, pH 7.3)แล้วนำไปศึกษา Isoenzyme starch gel eletrophoresis โดยใช้ Enzymes 11 ระบบ (Systems) ดังแสดงใน ตารางที่ 13.2 แล้วนำเอาข้อมูล Isoenzyme phenotype มา วิเคราะห์ความถี่ของยีน (Gene frequency) แต่ละตำแหน่ง ของไม้แต่ละชนิด รายละเอียดศึกษาได้จาก สุจิตรา (2536ก), สุจิตรา (2536ข) และ สุจิตรา (2536ค) นำข้อมูลดังกล่าวมาวิเคราะห์หาความหลากหลาย ทางพันธุกรรมระหว่างประชากรในไม้สะเดาไทยและไม้เสม็ดขาว โดยวัดค่า Genetic distance ในรูปของ Cluster analysis โดยใช้ Computer program ของ Swofford and Selander (1981)
การศึกษาความหลากหลายทางพันธุกรรมโดยใช้เครื่องหมายดีเอ็นเอและไอโซเอนไซม์ยีน
To see the actual publication please follow the link above