177 บทที่ 19 คดีนิติวิทยาศาสตร์โดยใช้เครื่องหมายดีเอ็นเอ คดีที่ 2: การพิสูจน์ว่าไม้มะม่วง (Mangifera sp.) ของกลางมาจากมะม่วงป่าที่เป็นไม้หวงห้ามหรือไม่ คำนำ ตามที่ได้รับหนังสือจากสำนักป้องกัน ปราบปราม และควบคุมไฟป่า ส่วนยุทธการด้านป้องกันและ ปราบปราม ที่ ทส 0904.302/1963 ลงวันที่ 8 กรกฎาคม 2558 เรื่องขอให้ตรวจพิสูจน์ไม้ของกลางจาก ตัวอย่างไม้ของกลาง 1 ตัวอย่าง ดังแสดงในภาพที่ 19.1 เพื่อต้องการพิสูจน์ว่า ไม้ของกลางว่าเป็นไม้หวงห้าม ตามบัญชีท้ายพระราชกฤษฎีกากำหนดไม้หวงห้าม พ.ศ. 2530 หรือไม่ อุทยานแห่งชาติรามคำแหงได้ตรวจ พิสูจน์เบื้องต้น พบว่าเป็นไม้มะม่วง (Mangifera sp.) จึงได้จัดส่งตัวอย่างเนื้อไม้มะม่วงของกลาง ใบมะม่วง ป่าในอุทยานแห่งชาติรามคำแหงและใบมะม่วงบ้านชนิดละ 1 ตัวอย่าง (มะม่วงน้ำดอกไม้ มะม่วงเขียวเสวย มะม่วงพิมเสน มะม่วงโชคอนันต์ มะม่วงเขียวใหญ่ มะม่วงฟ้าลั่น มะม่วงกะล่อนบ้าน มะม่วงเพชรบ้านลาด มะม่วงแก้ว และมะม่วงกล้วย) มาเพื่อการศึกษาเปรียบเทียบทางพันธุกรรม ดังแสดงในภาพที่ 19.2 ดังนั้น เพื่อความถูกต้อง และชัดเจน อุทยานแห่งชาติรามคำแหง จึงได้ทำการส่งตัวอย่างมาให้กรมอุทยานแห่งชาติ สัตว์ป่า และพันธุ์พืช เพื่อตรวจหารหัสพันธุกรรม ซึ่งผู้เขียนได้รับมอบหมายตามสายงานในการตรวจวินิจฉัย พันธุกรรมไม้ของกลางดังกล่าว วิธีการวินิจฉัยพันธุกรรม ได้มีการสกัด DNA จากตัวอย่างเนื้อไม้และใบไม้ จากตัวอย่างที่ส่งมาดังภาพที่ 19.1 และ 19.2 ด้วย ชุดสกัด DNeasy Plant Kit (QIAGEN) แล้วนำ ดีเอ็นเอที่สกัดได้มาเพิ่มปริมาณยีนในส่วนของคลอโรพลาสต์ จีโนม คือ trnH-psbA (intergenic spacer) ดังภาพที่ 19.3 แล้วจึงวิเคราะห์ลำดับนิวคลีโอไทด์ของยีนที่ ศึกษา จากหลักการของวิธี Chain termination method ใช้ชุด Big Dye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems, USA) โดยทำพีซีอาร์ซึ่งจะติดฉลากด้วยฟลูออเรสเซนต์ จากนั้น นำ PCR product ที่ได้ไปทำให้บริสุทธิ์ และนำสารละลายที่ได้มาวิเคราะห์ลำดับนิวคลีโอไทด์ โดยใช้เครื่อง วิเคราะห์ลำดับนิวคลีโอไทด์ ABI PRISM® 3100-Avant Genetic Analyzer (Applied Biosystems, USA) แล้วจึงวิเคราะห์ผลลำดับนิวคลีโอไทด์โดยการเปรียบเทียบความแตกต่างของลำดับนิวคลีโอไทด์ในการ เปรียบเทียบลำดับนิวคลีโอไทด์ของพืชแต่ละชนิดโดยผ่านโปรแกรม Bioedit , DnaSP4.0 และ Mega 3.1
การศึกษาความหลากหลายทางพันธุกรรมโดยใช้เครื่องหมายดีเอ็นเอและไอโซเอนไซม์ยีน
To see the actual publication please follow the link above