160 และนำไปเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอที่ยีน maturaseK (matK) โดยใช้ไพรเมอร์จาก Cuenoud et al. (2002) และ Muellner et al. (2003) จากนั้นนำผลผลิตพีซีอาร์ไปเชื่อมต่อเข้ากับพลาสมิดโดยใช้ pGEM-T Easy Vector System I kit (Promega) และถ่ายยีนเข้าสู่แบคทีเรียเจ้าบ้าน (host) เพื่อเพิ่มปริมาณพลาสมิดสายผสม จากนั้นนำไปตรวจ ยืนยันชิ้นดีเอ็นเอหรือยีนที่อยู่ในพลาสมิดสายผสมเพื่อตรวจสอบว่าโคโลนีที่เลือกมานั้นตรงกับขนาดหรือไม่ และนำ โคโลนีที่ได้เลี้ยงในอาหาร LB เพื่อสกัดแยกพลาสมิดให้บริสุทธิ์ เมื่อได้สารละลายพลาสมิดสายผสมที่บริสุทธิ์แล้ว นำมาทำการวิเคราะห์ลำดับนิวคลีโอไทด์โดยใช้ชุด Big Dye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems) และลำดับนิวคลีโอไทด์จะถูกนำมาตรวจสอบความถูกต้องโดยใช้โปรแกรม Bioedit เมื่อได้ลำดับ นิวคลีโอไทด์แล้ว จึงนำไปจำแนกกลุ่มของไม้สะเดาไทย (A. indica var. siamensis) และไม้สะเดาอินเดีย (A. indica) โดยใช้โปรแกรม MEGA 4 ด้วยวิธี Neighbour Joining ตารางที่ 16.1 ไม้สะเดาไทย (Azadirachta indica var. siamensis) และไม้สะเดาอินเดีย (A. indica) จากแหล่ง และประเทศต่างๆที่ใช้ในการศึกษาโดยเก็บรวบรวมจากสถานีทดลองปลูกนานาชาติ จ.กาญจนบุรี ลำดับ ชื่อวิทยาศาสตร์ ชื่อสามัญ ชื่อของแหล่ง พิกัด ละติจูด ลองติจูด 1 A. indica A.Juss. var. siamensis สะเดาไทย Ban Bo, Kalasin, Thailand 16 O17’N 103 O 35’N 2 A. indica A.Juss. var. siamensis สะเดาไทย Ban Nong Hoi, Kanchanaburi, Thailand 14 O 09’N 99 O 19’N 3 A. indica A.Juss. สะเดาอินเดีย Sunyani, Republic of Ghana 04 O 21’N 02 O 21’N 4 A. indica A.Juss. var. siamensis สะเดาไทย Doi Tao, Chiang Mai, Thailand 17 O 57’N 98 O 41’N 5 A. indica A.Juss. var. siamensis สะเดาไทย Vientiane, Lao People’s Democratic 18 O 00’N 10 2 O 45’ N 6 A. indica A.Juss. var. siamensis สะเดาไทย Tung Luang, Surat Thani, Thailand 09 O 09’N 99 O 07’N 7 A. indica A.Juss. สะเดาอินเดีย Ramannaguda, Orissa, Republic of India 19 O 05 ’N 83 O 49’N 8 A. indica A.Juss. สะเดาอินเดีย Yezin, Republic of the Union of Myanmar 19 O 51’N 96 O 16’N 9 A. indica A.Juss. var. siamensis สะเดาไทย Ban Nong Rong, Kanchanaburi, Thailand 14 O 05’N 99 O 40’N 10 A. indica A.Juss. สะเดาอินเดีย Myene, Republic of the Union of Myanmar 22 O 03’N 95 O 13’N 11 A. indica A.Juss. สะเดาอินเดีย Sagar, Chanatoria Madhya Pradesh, Republic of India 21 O 51’N 78 O 45’N 12 A. indica A.Juss. สะเดาอินเดีย Balharshah,Maharashtra, Republic of India 19 O 51’N 79 O 25’N
การศึกษาความหลากหลายทางพันธุกรรมโดยใช้เครื่องหมายดีเอ็นเอและไอโซเอนไซม์ยีน
To see the actual publication please follow the link above